产品描述

组织线粒体分离试剂盒(Tissue Mitochondria Isolation Kit)是可快速便捷地分离动物组织线粒体的试剂盒。本试剂盒可获得高纯度的具有生理功能的线粒体，可用于线粒体生理功能方面的研究（如线粒体膜电位检测等），也可用本试剂盒中线粒体裂解液裂解后用于常规的蛋白分析（如SDS-PAGE、Western、双向电泳等）。同时，本试剂盒可获得去除线粒体的细胞浆蛋白，可用于研究细胞色素c等线粒体蛋白向胞浆的释放。本试剂盒提供了两种不同的线粒体分离试剂，适用于不同组织样品。如果每个组织样品质量为50-100mg，本试剂盒可处理50-100个样品。

产品包装

运输与保存方式

      冰袋运输。胰酶消化液4℃保存，其余-20℃保存，有效期12个月。

使用说明

1.1．从软组织（如肝脏、脑组织）分离线粒体：

a．称取50-100mg组织，预冷PBS洗涤一次，在冰上用剪刀充分剪碎。

b．加入10体积预冷的线粒体分离试剂A，用玻璃匀浆器充分研磨组织10次左右。

c．收集匀浆液，4℃，600g离心5分钟。

d．收集上清至新的EP管，4℃，11,000g离心10分钟。

e．尽量去除上清，沉淀即为分离得到的线粒体。

f．如果需要收集去除线粒体的细胞浆蛋白，在步骤e之前，小心收集上清，尽量不接触到沉淀。收集到的沉淀在4℃12,000g离心10分钟，所得上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。

1.2．从硬组织（如心肌组织、骨骼肌组织）分离线粒体：

a．心肌组织使用线粒体分离试剂A，骨骼肌组织使用线粒体分离试剂B，其他组织可先使用线粒体分离试剂A，如果分离效果不好可以改用线粒体分离试剂B。

b．称取50-100mg组织，预冷PBS洗涤一次，在冰上用剪刀充分剪碎。

c．加入10体积预冷PBS，冰水浴3分钟。

d．4℃，600g离心10秒。弃上清，收集沉淀。

e．加入8体积预冷的胰酶消化液，冰水浴消化20分钟。

f．4℃，600g离心10秒。弃上清，收集沉淀。

g．加入2体积对应的线粒体分离试剂，重悬沉淀样品，以洗去残留胰酶。

h．4℃，600g离心10秒。弃上清，收集沉淀。

i．加入8体积预冷的对应线粒体分离试剂，用玻璃匀浆器充分研磨组织20次左右。

j．收集匀浆液，4℃，600g离心5分钟。

k．收集上清至新的EP管，4℃，11,000g离心10分钟。

l．.尽量去除上清，沉淀即为分离得到的线粒体。

j．如果需要收集去除线粒体的细胞浆蛋白，在步骤l之前，小心收集上清，尽量不接触到沉淀。收集到的沉淀在4℃12,000g离心10分钟，所得上清即为去除线粒体的细胞浆蛋白。

2．线粒体的使用：

a．如果用于完整线粒体的功能或酶活性研究，可以加入适量线粒体储存液，重悬线粒体。一般每100mg组织获得的线粒体可以用40μl相应的线粒体储存液重悬。该蛋白样品可以离心沉淀后裂解再用BCA法测定蛋白浓度。

b．如果用于线粒体的蛋白分析，初始重量为50-100mg的组织样品分离得到的线粒体样品中可以加入150-200μl临用前添加了PMSF的线粒体裂解液裂解线粒体。裂解后的线粒体可以用于PAGE、Western、IP以及线粒体中的一些酶活性的测定等。裂解后的蛋白样品可以使用BCA法测定蛋白浓度。

c．如果用于双向电泳，请使用适当的用于双向电泳的裂解液处理线粒体。

注意事项

1．本试剂盒只能使用于新鲜的动物组织，请勿使用经过冷冻保存的组织。

2．如需制备线粒体蛋白样品，线粒体分离试剂和线粒体裂解液中需添加PMSF，使PMSF终浓度为1mM。PMSF需在线粒体分离试剂或线粒体裂解液加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。

3．使用线粒体储存液稀释或储存的线粒体样品应及时使用，以免线粒体膜电位受影响。如不能及时使用，可在-80oC保存。冻存后的线粒体样品不建议用于膜电位的检测，但可用线粒体蛋白或核酸的相关检测。

4．使用过程中所用到的试剂耗材都需要进行预冷处理，并在冰上或4℃进行操作。

5．如果组织的重量为80mg，可以大致认为组织的体积接近80微升。

6．本产品仅为科研专用。

7．使用时，请穿实验服、佩戴一次性口罩、手套操作。